如何建立PCR實驗室

 PCR實驗室   上海PCR實驗室   醫學檢驗所   　

如何建立PCR實驗室

  1、建立樣品準備區　　

 ⑴PCR產物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。

 ⑵組織培養物、組織標本和血清樣品都帶進樣品準備間處理，以根據應用的需要提取DNA或RNA。

 ⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。

 ⑷DNA樣品應該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。

 ⑸大體積樣品應該用單獨包裝的無菌一次性移液管吸取。

 ⑹管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產生，而且管子不能用力崩開，這樣會產生氣溶膠。

 ⑺任何時候都應該穿實驗服和帶手套，手套要經常更換，尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實驗服要專門用于樣品準備間，經常清洗。　　

  2、樣品準備和RNA-PCRRNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機會。為了避免這一問題，反轉錄一步可以在樣品準備區進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止污染的方法也有報道。　　

  3、建立前PCR區。　　

 該去專門用于準備各種反應，這個區域必須保持干凈，而且沒有來自克隆和樣品準備的污染。前PCR區必須要有試劑和準備，特別是專門用于前PCR區的正壓活塞式移液管。　　

  4、PCR實驗室試劑的操作。　　

 ⑴所用的所有溶液都應該沒有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。

 ⑵所有PCR試劑中使用的水都應該是高質量的－新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌。

 ⑶在20℃到25℃貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品